如何检查无菌室或接种箱灭菌效果?

接种室(箱)在每次接种前均要采用化学方法进行消毒灭菌,灭菌效果受药剂有效期及操作等因素影响,很不稳定,因此应定期对消毒灭菌效果和空气污染程度进行检验,以便更换失效药剂,改进消毒措施和操作方法。常用检验方法有平板法和斜面法两种:
(1)平板法:一般是采用培养微生物主要类群的常规法,配制肉汤琼脂培养基和马铃薯葡萄糖培养基,按无菌操作规程分别将培养基倒入培养皿中制成平板,每种培养基各取6个,同时放入接种室(箱)内。检验时,按无菌操作法各打开3个皿盖,暴露一定时间后再重新盖上;另3个不打开皿盖作对照。然后将两组一起置于30℃温度条件下进行培养,48小时后取出观察。根据有无菌落、菌落个数和形态,来判断接种室(箱)被污染程度和杂菌种类。
(2)斜面法:取常规制作的肉汤琼脂培养基和马铃薯葡萄糖培养基斜面试管各6支,放入接种室(箱)内,按无菌操作法各打开其中3管试管棉塞(拔下的棉塞置于无菌培养皿中),暴露一定时间后,再重新塞上棉塞,另3管不打开棉塞作对照,然后将两组一起置于30℃温度条件下培养, 48小时后取出观察。根据有无菌落、菌落个数和形态,来判断接种室(箱)被污染程度和杂菌种类。
合格标准:平皿打开盖5分钟不超过3个菌落;斜面打开棉塞30分钟不长菌落。若生长菌落超过此数字,则要采取措施提高灭菌效果。如果是用紫外线灯照射达不到灭菌要求,则可调整紫外线灯照射时间或悬挂高度,或更换新灯管。从菌落形态看,如果是霉菌占多数,先用5%石炭酸对接种室(箱)进行全面喷雾,再用福尔马林熏蒸;如果是细菌占多数,采用乳酸和福尔马林交替熏蒸法效果好。

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